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大腦皮層神經元原代培養

簡要描述:大腦(nao)皮層神(shen)經元(yuan)原代培(pei)養(yang)是(shi)將胚胎哺乳(ru)動物中樞神(shen)經系統的部(bu)分(fen)組(zu)織,如(ru)大腦(nao)皮層、海馬、脊髓等腦(nao)組(zu)織直接(jie)取出(chu),再接(jie)種(zhong)培(pei)養(yang)的方法。目(mu)前(qian)國(guo)內、外有關神(shen)經元(yuan)培(pei)養(yang)的方法較多,但在原代培(pei)養(yang)中神(shen)經元(yuan)的純度和產量方面還存(cun)在一(yi)些急待解(jie)決的問題(ti)。由于神(shen)經元(yuan)是(shi)一(yi)種(zhong)高度分(fen)化的細胞,相(xiang)對(dui)于其它細胞而言,神(shen)經元(yuan)在體(ti)外更(geng)難(nan)以存(cun)活和生長。因(yin)此,體(ti)外培(pei)養(yang)神(shen)經元(yuan)要求的培(pei)養(yang)方法和營(ying)養(yang)條件均較為特殊。

  • 更新時間:2023-10-30
  • 廠商性質:代理商
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詳細介紹

品牌其他品牌產地類別國產
應用領域醫療衛生,化工,生物產業

  大腦皮層神經元原代培養細胞實驗

  一、背景

  神(shen)經(jing)元(yuan)原代(dai)培(pei)養是(shi)(shi)將胚胎哺乳動物中(zhong)樞神(shen)經(jing)系統的(de)部分組織,如大(da)腦皮層、海馬、脊髓等腦組織直接(jie)取出,再接(jie)種培(pei)養的(de)方(fang)法。目前(qian)國內(nei)、外(wai)有關神(shen)經(jing)元(yuan)培(pei)養的(de)方(fang)法較(jiao)多(duo),但(dan)在(zai)原代(dai)培(pei)養中(zhong)神(shen)經(jing)元(yuan)的(de)純度和(he)產量方(fang)面還存在(zai)一些急待解決的(de)問題(ti)。由于神(shen)經(jing)元(yuan)是(shi)(shi)一種高(gao)度分化的(de)細(xi)胞,相對于其(qi)它(ta)細(xi)胞而言,神(shen)經(jing)元(yuan)在(zai)體(ti)外(wai)更難(nan)以(yi)存活和(he)生(sheng)長。因此(ci),體(ti)外(wai)培(pei)養神(shen)經(jing)元(yuan)要求的(de)培(pei)養方(fang)法和(he)營養條(tiao)件均較(jiao)為特殊(shu)。

  神(shen)(shen)(shen)(shen)經(jing)(jing)細(xi)胞的(de)(de)體(ti)(ti)外培(pei)養(yang)技(ji)術是研究(jiu)神(shen)(shen)(shen)(shen)經(jing)(jing)源性疾病(bing)的(de)(de)發病(bing)機制、進程的(de)(de)一個(ge)(ge)重(zhong)要工具(ju),能很(hen)好的(de)(de)、直觀的(de)(de)反映(ying)離體(ti)(ti)神(shen)(shen)(shen)(shen)經(jing)(jing)元的(de)(de)發育狀況(kuang)和生理活(huo)性,如何建立一個(ge)(ge)穩定成熟(shu)的(de)(de)神(shen)(shen)(shen)(shen)經(jing)(jing)細(xi)胞培(pei)養(yang)體(ti)(ti)系是神(shen)(shen)(shen)(shen)經(jing)(jing)系統疾病(bing)體(ti)(ti)外實驗(yan)研究(jiu)順利進行的(de)(de)基礎(chu)。隨著基礎(chu)醫學(xue)及臨床醫學(xue)研究(jiu)的(de)(de)逐漸深(shen)入,神(shen)(shen)(shen)(shen)經(jing)(jing)細(xi)胞的(de)(de)體(ti)(ti)外培(pei)養(yang)技(ji)術在腦損(sun)傷、神(shen)(shen)(shen)(shen)經(jing)(jing)障(zhang)礙(ai)性疾病(bing)、衰老相關(guan)神(shen)(shen)(shen)(shen)經(jing)(jing)疾病(bing)方面得到廣泛(fan)重(zhong)視和普及應用。

  二、大腦皮層神經元原代培養細胞實驗步驟

  (1)75%(體積分數(shu))酒精消毒孕鼠,在無菌條件下取(qu)出(chu)胎鼠,分離并切取(qu)大腦(nao)皮(pi)層,置于冷的(de)(de)無鈣、鎂的(de)(de)HBSS液(ye)的(de)(de)平皿中(下置冰袋)。

  (2)解剖顯微鏡無(wu)菌條件下仔細(xi)剝(bo)離大(da)腦皮層。

  (3)用彈簧剪(jian)將(jiang)大腦皮層剪(jian)成1cm3大小(xiao),消(xiao)(xiao)化(hua)液(ye)37℃消(xiao)(xiao)化(hua)15-20min,每五分鐘振蕩一次;

  (4)去掉上清(qing),加(jia)入終止(zhi)液終止(zhi)消化(hua),吹(chui)打10-15次,不能有氣泡,收集上清(qing),剩余組織再消化(hua)一次。

  (5)4℃1000rpm離心(xin)10min,棄上清,加入種植液1重懸,培養箱內差速貼(tie)壁30min;

  (6)收集上清,臺盼藍染(ran)色計數,按(an)6*105cells/孔(kong)(kong)種(zhong)入六(liu)孔(kong)(kong)板(種(zhong)植液1),37℃,5%CO2,95%飽和濕(shi)度的培養(yang)(yang)箱中培養(yang)(yang);

  (7)培養第二天,全換(huan)液(ye)更(geng)換(huan)為種植液(ye)2;

  (8)培(pei)養第四(si)天(tian),半(ban)量換液加入5uM的(de)阿糖(tang)胞苷,24h全量換液;

  (9)之(zhi)后(hou)每周(zhou)換液兩次(ci)。




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